实验要点及说明：
 1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；产品仅用于科研
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
产品属性：

产品名称：T98G (脑胶质瘤细胞)
规格：1×10⁶cells/T25培养瓶
生长培养基：MEM＋10% FBS＋1% P/S
名称  T98G (脑胶质瘤细胞) (STR鉴定正确)
别称 T 98 G; T-98G; T98 G; T98-G

种属 人类

年龄（性别） 男性，61岁

组织来源 脑组织

生长特性 贴壁细胞

细胞形态 成纤维细胞样

背景描述 When deprived of serum or when crowded, the cells enter a viable G1 arrested state. The cells are anchorage independent.

生物安全等级 1

生长培养基 MEM＋10% FBS＋1% P/S

推荐传代比例 1:3-1:5

推荐换液频率 2~3次/周

倍增时间 ~28-40小时

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

培养操作:
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

小鼠elisa试剂盒   小鼠试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠试剂盒、小鼠elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠乙酰elisa试剂盒   小鼠乙酰试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠乙酰试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠乙酰试剂盒、小鼠乙酰elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。

小鼠单胺氧化酶el
人羊膜间充质基质细胞HAMSC

MME Others Cynomolgus 食蟹猴 CD10 / Neprilysin / MME 人细胞裂解液 (阳性对照)

非洲绿猴肾细胞(SV40转化);COS-1 [COS1]

大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-2H3 肝癌细胞，BEL-7404细胞 CEL细胞，鸡胚原代肝细胞

RBE, 人肝管癌细胞 Human

CST2 Others Human 人 CST2 / Cystatin-2 / Cystatin-SA 人细胞裂解液 (阳性对照)
T98G (脑胶质瘤细胞)人羊膜间充质基质细胞HAMSC

MME Others Cynomolgus 食蟹猴 CD10 / Neprilysin / MME 人细胞裂解液 (阳性对照)

非洲绿猴肾细胞(SV40转化);COS-1 [COS1]

大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞;RBL-2H3 肝癌细胞，BEL-7404细胞 CEL细胞，鸡胚原代肝细胞

RBE, 人肝管癌细胞 Human

CST2 Others Human 人 CST2 / Cystatin-2 / Cystatin-SA 人细胞裂解液 (阳性对照)
冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。